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    温州电泳加工常见的电泳液有哪些配制呢?

    添加时间:2018/12/21
    常用染料、电泳缓冲液、凝胶加样液和杂交液的配制:
    1.1%溴酚蓝(bromophenol blue):加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
    2.1%二甲苯青FF(xylene cyanole FF):溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。
    3.5mg/ml的溴化乙锭(EB,ethidium bromide):小心称取0.5g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管,于4℃储存。工作浓度0.5mg/L水溶液。

    一、DNA电泳
    1.?Tris-乙酸(TAE:Tris/Acetate/EDTA)
    浓贮存液/L(50×):2mol/L Tris-碱,1 mol/L 乙酸,50 mmol/L EDTA
    方法:?242.2 g Tris-碱,用300mL水加热搅拌溶解后,加57mL冰乙酸,加入100mL 0.5mol/L EDTA(pH8.0),用冰乙酸调pH值至8.0,定容为1L。
    2. Tris-硼酸(TBE:Tris/Borate/EDTA)
    浓贮存液/L (5×) : 90mmol/L Tris-碱,890mmol/L 硼酸盐,20mmol/L EDTA(pH8.0)
    方法:54g Tris碱、27.5硼酸、20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0),水定容至1L。
    使用液:(0.5×):0.045mol/L Tris-磷酸,0.001mol/L EDTA
    注:进行聚丙烯酰胺凝胶电泳使用的是1×TBE,琼脂糖凝胶电泳使0.5×TBE,这是因为聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小,需加强离子强度,提供稍高一些的电流。
    3. Tris-磷酸(TPE)
    浓贮存液/L(10×):0.9mol/L Tris-磷酸、0.02mol/L EDTA
    方法:108g Tris碱、15.5ml 85%磷酸(1.679g/ml)、40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0),?水定容至1L。
    使用液(1×):0.09mol/L Tris-磷酸、0.002mol/L EDTA
    4.?Tris-甘氨酸(Tris-甘氨酸缓冲液用于SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。)
    浓贮存液/L(5×):125mmol/L Tris 、1.25mol/L EDTA、0.5%SDS
    方法:15.1g Tris碱、9.4甘氨酸(电泳级)(pH8.3)、50ml 10%SDS(电泳级)
    使用液(1×):25mmol/L Tris 、250mmol/L EDTA、0.1%SDS
    5.TBS 电泳缓冲液:100ml TBE,0.5ml的10% SDS。
    6.6×上样液:0.25%溴酚蓝(BPB),40%蔗糖,10mmol/L EDTA(pH8.0)。即2.5ml 1%溴酚蓝,2.5ml 1%二甲苯青FF,4g蔗糖,补足水到10ml,4℃保存。
    二、RNA电泳
    1.RNA标准相对分子质量:如28S和18SrRNA以及9S兔β-球蛋白mRNA,其RNA大小为6333、2366和710个核苷酸。
    2.DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水:
    0.1% DEPC,水,即加1ml DEPC(diethlpyrocarbonate)于1L水中,使DEPC的体积分数为0.1%。在37℃温浴至少12h,然后在15psi条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺其反应,不可用DEPC处理

    Tris缓冲液。
    3.5×FGRB(formaldehyde gel-running buffer):
    100mmol/L 3-(N-吗啉代)-丙磺酸(MOPS,pH7.0),40mmol/L醋酸钠,5mmol/L EDTA(pH8.0)。即准确称取20.93g MOPS用DEPC处理水溶解,再加入13.3ml的3 mol/L ?????
    NaAc(pH7.0),10ml的0.5 mol/L EDTA(pH8.0),最后定容至1000ml,过滤灭菌后避光保存(pH7.3)。
    4.RNA凝胶上样缓冲液:
    50%甘油、1mmol/L EDTA(pH8.0)、0.25%溴酚蓝、0.25%二甲苯青FF。即2.5ml甘油、10μL 0.5 mol/L EDTA(pH8.0),1.25ml 1%溴酚蓝,1.25ml 1%二甲苯青FF,用DEPC处理水定容至5ml,分装后-70℃保存。
    5.RNA胶(1%):
    1g琼脂糖加62ml DEPC水,加热溶化后冷却至60℃,再加20ml的5×FGRB和17.8ml的37%甲醛,混匀后制胶。
    6.甲酰胺(去离子):
    将10ml甲酰胺和1g离子交换树脂混合,室温搅拌1h后用Whatman滤纸过滤,等分成1ml于-70℃贮存。
    7.其他试剂:
    37%甲醛、80%乙醇(利用DEPC处理水配制)。
    三、蛋白质电泳
    1.电泳用标准蛋白Marker
    2.10%(M/V)过硫酸铵(APS):
    1g APS加ddH2O至10ml。使用时尽量现配现用,4℃存则两周内用完,最多不能超过一个月。-20℃可存两个月,但一旦解冻后尽快用完。
    3.TEMED和DTT(dithiothretol):置于棕色瓶中,存放在4℃冰箱。
    蛋白质样品溶解液:SDS 100mg,巯基乙醇0.1 mL,甘油1.0mL,溴酚蓝2mg,Tris-HCL缓冲溶液2mL,加蒸馏水至总体积10mL。

    4.30%胶母液(Acr-Bis):
    30% Acrylamide、0.8%bis,即Acrylamide 30g、bis 0.8g定容至100ml,可在4℃存放数月。
    5.分离胶缓冲液(pH8.8):
    3mol/L Tris,即Tris 36.3g,加入1mol/L HCl溶液48.0mL,pH8.8,定容100ml。
    6.浓缩胶缓冲液(pH6.8):
    1mol/L Tris,即Tris?12.1g,pH6.7,定容100ml。
    7.10×电极缓冲液:
    50mmol/L Tris、384mmol/L甘氨酸、1%SDS。即Tris 6g、Glycine28.8g、SDS 10g,调pH至8.3,定容至1L。
    8.4×SDS上样缓冲液:
    200mmol/L Tris-HCl(pH6.8)、8%SDS、0.04%溴酚蓝、40%甘油、400mmol/L DTT(或8%β-巯基乙醇),4℃保存。
    9.2×SDS上样缓冲液:
    0.1 mol/L Tis(pH6.8)、4%SDS、0.02%溴酚蓝、20%甘油、200mmol/L DTT(或4%β-巯基乙醇),4℃保存。
    10.染色液:1g考马斯亮蓝R-250、500ml甲醇、100ml冰醋酸,定容至1L。
    11.脱色液:50ml甲醇、75ml冰醋酸,加水定容至1L。

    ⑹蛋白电泳试剂及其配制
    分离胶缓冲溶液:Tris 36.3g,加入1mol/L HCl溶液48.0mL,再加入蒸馏水到100mL,pH8.9。
    浓缩胶缓冲溶液:Tris 5.98g,加1mol/L HCL溶液48.0mL,加蒸馏水到100mL,pH6.7。
    凝胶贮液:Acr 30.0g,Bis0.8g,加蒸馏水到100mL。
    电极缓冲溶液:SDS 1g,Tris 6g,甘氨酸28.8g,加蒸馏水至1000mL,pH8.3。
    固定液:取50%甲醇454mL,冰醋酸46mL,混匀。
    SDS染色液:1.25g考马斯亮蓝R-250,加454mL 50%甲醇溶液和46mL冰醋酸,混匀。脱色液:取乙醇250ml,冰醋酸100mL,加蒸馏水到1000mL,600C脱色。




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